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化易AI
2025-03-10回答
細(xì)胞色素c制備的步驟包括： 1. 將新鮮或冷凍豬心洗凈，去血塊、脂肪和肌腱等，切條，用絞肉機(jī)絞碎。 2. 加入1.5倍的水，用1mol/L的硫酸調(diào)節(jié)pH值為4左右，常溫下攪拌，浸提2h，壓濾。 3. 濾液用1mol/L的氨水中和至pH=6.2，離心分離取清液。殘?jiān)儆玫攘克貜?fù)提取一次，合并兩次提取液。 4. 提取液用2mol/L氨水調(diào)pH值為7.5，靜止沉淀雜蛋白，離心，吸取上層清液。 5. 按每升提取液加入10g沸石，在不斷攪拌下充分吸附40min，靜置，棄去上層清液。用蒸餾水洗滌吸附有細(xì)胞色素C的沸石3次，用0.2%的氯化鈉洗滌4次，再用蒸餾水洗至洗滌液澄清。 6. 過濾沸石，抽干，裝入色譜柱中，并用25%的硫酸銨溶液洗脫，收集洗脫液。洗脫液中加入固體硫酸銨使?jié)舛冗_(dá)45%，雜蛋白完全析出，過濾。 7. 濾液中緩慢加入三氯乙酸(20%)溶液，邊加邊攪拌，待細(xì)胞色素C沉淀完全析出后，離心收集沉淀。 8. 將沉淀溶于蒸餾水，用水透析至無硫酸根離子。將透析后溶液通過已處理好的Amberlite IRC 50(NH+4)樹脂柱吸附，用水洗滌至澄清，再用磷酸氫二鈉(0.6mol/L)和氯化鈉(0.4mol/L)混合液洗脫，洗脫速要慢，一般流速為2ml/min。洗脫液再用蒸餾水透析至無氯離子為止，可得細(xì)胞色素C精品溶液。 以上信息僅供參考，具體操作請(qǐng)按實(shí)際需求調(diào)整。
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